ELISA試劑盒檢測(cè)關(guān)于特異性顯色詳細(xì)【白介素elisa試劑盒】

發(fā)布時(shí)間：2021/6/16 10:32:15      閱讀次數(shù)：1798

 ELISA試劑盒對(duì)于間接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的絕對(duì)誤差,會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差,使陰性（或弱陽(yáng)性）標(biāo)本呈陽(yáng)性（或陰性）.加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡.目前,大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差.

在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,ELISA試劑盒應(yīng)引起操作者重視.無(wú)論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的.通過(guò)洗滌以消除殘留在板孔中沒(méi)能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì).

每種試劑都有其最佳反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素.因孵育溫度高,反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),會(huì)造成整板本底高,陽(yáng)性率高.溫育一般用濕盒或水浴,ELISA試劑盒反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋.

作為記錄測(cè)定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度.首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對(duì)濾光片要定期校正；其次酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置要正確,最好使用雙波長(zhǎng),一個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng),一個(gè)參比波長(zhǎng),以消除微孔板底部劃痕 不平 指印或液面高度差異造成的光干擾.此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)最好先擦試微孔板底部并壓平板條.由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同,使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)

ELISA試劑盒綜上所述,盡管目前國(guó)際上以及我國(guó)有了部分標(biāo)準(zhǔn)血清或參比血清（血清盤）,但是酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)目前在技術(shù)上尚未做到標(biāo)準(zhǔn)化.受方法學(xué)及技術(shù)條件的限制,在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定中有時(shí)不可避免的會(huì)出現(xiàn)一定的非特異性,ELISA試劑盒我們可以通過(guò)以上措施把非特異性顯色降至最低限底,從而提高檢測(cè)的特異性,并得到更準(zhǔn)確 可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果.

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）自問(wèn)世以來(lái),以其敏感性高,特異性強(qiáng),操作簡(jiǎn)便 安全,開(kāi)創(chuàng)了免疫學(xué)診斷的新紀(jì)元在臨床診斷方面得到了廣泛的應(yīng)用.但是ELISA試劑盒在它的研究 生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性顯色問(wèn)題,ELISA試劑盒特異性 檢驗(yàn)標(biāo)本中含酶標(biāo)記物的干擾物,操作不當(dāng)?shù)纫蛩囟紩?huì)導(dǎo)致這樣的結(jié)果.本文就在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特異性顯色作以分析.

風(fēng)濕因子（RF） 黃疸等,類風(fēng)濕因子是可作用于多種動(dòng)物以及人IgGFc段的自身抗體,多數(shù)為IgM類,能充當(dāng)抗原成分與固相及酶標(biāo)抗體反應(yīng),從而呈現(xiàn)非特異性顯色.

黃疸血標(biāo)本中常含有內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,如用辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記物,就有可能產(chǎn)生非特異性顯色.

常因樣品采集 貯存 處理不當(dāng)造成如樣品溶血,被細(xì)菌污染,標(biāo)本凝集不全等.溶血標(biāo)本,紅細(xì)胞溶解破裂,釋放紅素形成,而血紅素中的鐵卟啉是過(guò)氧化物酶的類似物,以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色.如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP（辣根過(guò)氧化酶）,ELISA試劑盒有國(guó)內(nèi)報(bào)道酶免HBsAg試劑檢測(cè)溶血標(biāo)本時(shí)可造成假陽(yáng)性.如在冰箱中保存過(guò)久,其中的IgG可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深.因此,血標(biāo)本在采集處理時(shí)應(yīng)小心,在冰箱中保存不易過(guò)久.

ELISA試劑盒標(biāo)本凝集不全時(shí),血清中會(huì)殘留部分纖維蛋白原,也易造成假陽(yáng)性.

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